三联薄膜过滤器,无菌检查薄膜过滤器需要用0.22um滤膜吗

1、灭菌方法

培养基的灭菌方法主要bai有两种,高压除菌及0.22um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比,高压灭菌的工作强度小,成本较低,但易造成营养成分的流失,而且在多次加样(无菌谷氨酰胺溶液,无菌碳酸氢钠溶液等)过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用0.10.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌,并且已成为培养基除菌的发展方向,它可低限度地减少培养基的营养损失。1.1 高压灭菌某些培养基(如MEM)可进行高压灭菌,例如清大天一的MEM培养基中的MD605MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠,一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)可代替L-谷氨酰胺。三联薄膜过滤器

可高压灭菌的培养基在121℃、15psi15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失,不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果,灭菌设备的验证很关键。

1.2 过滤灭菌

可供过滤灭菌使用的滤膜很多,其材料多为polyethersulphonePES)、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。一般情况下采取正压过滤,正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染,可避免蛋白质产生大量气泡等优点。一般使用过滤器可参照各供应商的产品说明书。

目前大多数实验室和制采用微孔滤膜滤器(如Zeiss滤器)或立式微孔滤器(MilliporePall)除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢,中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时,先要用培养用水将滤膜充分润湿,在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧,凡与空气接触部位都要包好(可用牛皮纸、纱布、无纺布等);高压灭菌后,在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后,要打开滤器,检查滤膜是否完整,如果滤膜破裂,需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器可以选用不同的微孔滤柱体积,因为滤膜的折叠,膜面积显著增大,液体处理量大,而且不容易发生堵塞现象。


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